Экспресс-тест на антибиотики по Решению №28 Коллегии ЕЭК MILK-QELTT (Kwinbon Biotechnology Co., Ltd) для определения фторхинолонов, линкомицина, макролидов и эритромицина в сыром, пастеризованном, стерилизованном, предварительно восстановленном сухом молоке и сыворотке. Время анализа – 9 минут.
MILK-QELTT предназначен для качественного экспресс-анализа по выявлению остаточных количеств фторхинолонов, линкомицина, макролидов и эритромицина в сыром, пастеризованном, стерилизованном, предварительно восстановленном сухом молоке с пределом определения на уровне не выше установленного Перечне, утвержденном Решением № 28 Коллегии ЕЭК от 13 февраля 2018 г.
MILK-QELTT определяет остаточное количество следующих ветеринарных препаратов: Фторхинолоны (Сарафлоксацин, Норфлоксацин, Офлоксацин, Ципрофлоксацин, Дифлоксацин, Данофлоксацин, Ломефлоксацин, Левофлоксацин, Налидиксовая кислота, Флероксацин, Пефлоксацин, Флюмеквин, Эноксацин, Энрофлоксацин, Оксолиновая кислота, Марбофлоксацин, Циноксацин, Пазуфлоксацин, Орбифлоксацин), Макролиды (Тилозин, Тилмикозин), Эритромицин, Линкозамиды (Линкомицин).
Тест-набор MILK-QELTT рассчитан на проведение анализа 96 проб молока, молочной сыворотки и включает:
• пластиковые тубы с 8 микролунками и 8 тест-полосками (12 туб);
• пластиковые наконечники (на 200 мкл) для отбора проб (96 шт.);
• положительный контроль (1 пластмассовый флакон) - сухое молоко, содержащее 4 мкг/кг (0,0012 мг/кг) данофлоксацина, 2 мкг/кг (0,002 мг/кг) линкомицина, 5 мкг/кг (0,005 мг/кг) тилозина, 1 мкг/кг (0,001 мг/кг) эритромицина, точная концентрация препарата в позитивном контроле указывается в сертификате соответствия;
• негативный (отрицательный) контроль - чистое сухое молоко (1 пластмассовый флакон);
• пластиковая подставка для панелей с микролунками – 1 шт;
• инструкция по применению тест-набора – 1 шт;
• сертификат соответствия и надлежащего производственного контроля – 1 шт.
Принцип действия тест-набора MILK-QELTT основан на конкурентном иммунохроматографическом определении остатков препаратов. Каждая микролунка панели содержит определенное количество специфических рецепторов и моноклональные антитела к фторхинолонам, линкозамидам, макролидам и эритромицину, конъюгированные с частицами золота. Если в лунку внесено «чистое» молоко, антитела меченные золотом способны мигрировать по хроматографической полоске, помещенной в лунку с пробой, и образовывать цветные линии в местах фиксации на полоске соответствующих препаратов. Если в молоке есть специфичный препарат или несколько препаратов, они реагируют с моноклональными антителами, конъюгированными с частицами золота из-за чего окрашивания реакционных линий не происходит или интенсивность окраски реакционной линии (линий) меньше, чем на контрольной тест-полоске.
Порядок применения тестов MILK-QELTT
Для проведения анализа используйте инкубатор-термостат (твердотельный термостат) с рабочей температурой (+45 ±2 °С) или твердотельный термостат с лунками, обеспечивающими плотный контакт с микролунками тест-набора.
Перед началом исследования достаньте требуемое количество микролунок и тест-полосок из холодильника и выдержите их при комнатной температуре (до достижения температуры окружающей среды). Тест-полоски необходимо использовать в течение 24 часов после извлечения их из холодильника. Не проводите одновременный анализ более 8 проб.
Включите инкубатор-термостат и ожидайте когда температура достигнет +45 °C.
Тщательно размешайте пробы молока или молочной сыворотки до однородной консистенции. Для исследования сухого продукта необходимо в чистой емкости смешать 10 г сухого молока с 90 мл теплой (+45 °С) дистиллированной воды или 12,5 г сухой молочной сыворотки с 87,5 мл теплой (+45 °С) дистиллированной воды до полного растворения продукта. Значение рН молочной сыворотки не должно быть менее 6, в противном случае значение рН необходимо довести до 6–7, добавляя раствор гидроокиси натрия молярной концентрации 1 моль/дм3.
При открытии новой упаковки тестов проведите исследование отрицательного и положительного контролей.
Отрицательный контроль: в пластиковую банку с чистым сухим молоком добавьте 5 мл теплой (+45 °С) дистиллированной или деионизированной воды. Хорошо взболтайте смесь и подождите 1 мин 30 сек., после этого встряхните флакон в течение 10 секунд.
Раствор отрицательного контроля хранится не более 24 часов (в темном месте при температуре от +2 °С до +8 °С и относительной влажности воздуха не более 85 %).
Положительный контроль: достаньте микролунку (белого цвета) с антибиотиками из металлизированного саше, добавьте в нее 200 мкл раствора из банки с отрицательным контролем, помешайте раствор 3-5 раз с помощью дозатора до полного разбавления реагентов. Не добавляйте в микролунку с белым раствором тестовую полоску. Раствор положительного контроля хранится не более 24 часов (в темном месте при температуре от +2 °С до +8 °С и относительной влажности воздуха не более 85 %).
Откройте пластиковую тубу и извлеките панель с микролунками (фиолетового цвета). Снимите пластиковую крышку с микролунки и поместите ее в термостат (нагретый до температуры +45 °C).
Добавьте в микролунку из тубы 200 мкл пробы молока или отрицательного контроля
или положительного контроля. Размешайте пробу находящуюся в микролунке с помощью дозатора 3-5 раз до полного разбавления реагентов.
После смешивания компонентов нажмите на кнопку START (ЗАПУСК) инкубатора-термостата и проведите первую инкубацию в течение 3-х минут (до звукового сигнала).
По истечении 3-х минутной инкубации опустите в микролунку тест-полоску маленькой пористой подложкой снизу (опускаемый конец тест-полоски ориентирован ко дну пластиковой тубы).
Проведите вторую инкубацию с тест-полоской в течение 6 минут (до звукового сигнала). В течение этого времени происходит поднятие жидкости вверх по тест-полоске и на ней проявляются линии.
По истечении 6 минут (после звукового сигнала) достаньте тест-полоску из микролунки, удалите с нижней части губку (короткую пористую подложку), разместите тест-полоску на белом листе бумаги и прочитайте результат в течение 5 минут.
Учет и интерпретация результатов
Учет результатов и их интерпретацию проводите только в том случае, если на тест-полосках видна верхняя контрольная линия и получены корректные результаты на тест-полосках с контролями: на полоске с отрицательным контролем видны 5 линий, на тест-полоске с положительным контролем только одна верхняя линия или она ярче остальных.
Для чтения результат сравните линию антибиотика с контрольной линией, обращая внимание на наличие и интенсивность окраски линий. Толщина линий не имеет значения. Начните оценку с нижней линии линкомицина.
Если линия антибиотика имеет более интенсивный цвет, чем контрольная линия, то результат отрицательный, исследуемая проба не содержит антибиотика или его концентрация ниже предела, указанного в таблице c чувствительностью.
Если линия антибиотика такая же или светлее по цвету, чем контрольная линия или она отсутствует, то результат положительный, исследуемая проба содержит антибиотики на уровне или выше указанного в таблице c чувствительностью.
Аналогично проведите оценку других линий антибиотиков. При получении сомнительного результата или необходимости подтверждения положительного результата проведите тест повторно.
Для определения наличия антибиотиков, учета и хранения результатов можно использовать считывающее устройство. Определение и учет результатов с использованием считывающего устройства необходимо провести в течение 5 минут после завершения теста.
Указания по применению и меры безопасности
Тест-набор не содержит опасных компонентов. Использованные компоненты утилизируются в общем порядке.
Если в пластиковой тубе остаются реагенты, ее необходимо плотно закрыть крышкой. Не вскрывайте новую пластиковую тубу, не использовав полностью предыдущую.
Если для исследования предполагается использовать меньше 8 микролунок, отломите необходимое количество лунок, сохраняя на оставшихся микролунках крышки.
Тест-полоски можно сохранить. Для этого после окончания теста с нижней части удалите короткую пористую подложку и просушите тест-полоску.
Применяемые для определения антибиотиков оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы, не входящие в состав тест-систем, должны соответствовать нормативным актам и применяться в соответствии с документацией на них.
Транспортировка и хранение
Перевозите тест-наборы любым видом транспорта в течение 2 суток при температуре не выше 25 °С.
Храните тест-наборы в сухом темном месте при температуре от +2 °С до +8 °С в течение срока годности.
Растворенные контрольные образцы хранятся не более 24 часов в сухом темном месте при температуре от +2 °С до +8 °С.
Гарантии изготовителя
Завод-изготовитель Kwinbon Biotechnology гарантирует соответствие тест-набора требованиям технических условий при соблюдении потребителем условий транспортирования, хранения и эксплуатации.